使用合適的濾光片可在熒光成像時(shí)選擇合適的光線
濾光片組合放在在熒光檢測(cè)顯微鏡的不同光點(diǎn)上,用以設(shè)定激發(fā)樣品的光線波長(zhǎng),并準(zhǔn)確捕捉熒光發(fā)射的波長(zhǎng)。
激發(fā)濾光片、二向分色鏡以及發(fā)射濾光片通常包含在同一立方體內(nèi),通常被設(shè)計(jì)來(lái)匹配特定熒光團(tuán)或熒光蛋白的光譜。偶爾情況下,濾光片也可能不在立方體內(nèi),但會(huì)安裝在一個(gè)轉(zhuǎn)輪(稱為濾光片轉(zhuǎn)盤(pán))上。濾光片轉(zhuǎn)盤(pán)使您可以混合搭配盡可能匹配所需要的激發(fā)和發(fā)射波長(zhǎng)。其終極目標(biāo)是捕獲到您希望從結(jié)合靶標(biāo)的熒光基團(tuán)束上捕獲的光信號(hào),同時(shí)阻斷系統(tǒng)其他部分的任何光線(環(huán)境光、激發(fā)光源等)。
熒光信號(hào)檢測(cè)濾光片的不同類型
通常情況下,濾光片組被設(shè)計(jì)成可用于捕獲指定熒光團(tuán)的最大激發(fā)和發(fā)射波長(zhǎng),但不會(huì)捕獲所有的熒光。多數(shù)現(xiàn)代化濾光片組的設(shè)計(jì)旨在確保激發(fā)濾光片只允許指定波長(zhǎng)區(qū)間的光線通過(guò)。這種類型的濾光片稱為帶通濾光片(band-pass filter)。帶通濾光片通常通過(guò)中間波長(zhǎng)和區(qū)間寬度確定。在較為簡(jiǎn)單的熒光顯微鏡裝置中,一旦激發(fā)光線離開(kāi)激發(fā)濾光片,即會(huì)照射到靶標(biāo)上,靶標(biāo)上的熒光基團(tuán)隨即變?yōu)榧ぐl(fā)狀態(tài),然后發(fā)射向光譜的紅外端(相對(duì)于激發(fā)光線)遷移的光線。并非所有此類發(fā)射光線都會(huì)被檢測(cè)器捕獲到——僅那些允許通過(guò)二向分色鏡且能通過(guò)發(fā)射濾光片的光線。發(fā)射濾光片通常為帶通濾光片或長(zhǎng)通濾光片,具體取決于特定的熒光團(tuán)和成像實(shí)驗(yàn)。如果您希望讓超過(guò)特定波長(zhǎng)的光線通過(guò)檢測(cè)器,可選擇長(zhǎng)通濾光片。
濾光片組合放在在熒光檢測(cè)顯微鏡的不同光點(diǎn)上,用以設(shè)定激發(fā)樣品的光線波長(zhǎng),并準(zhǔn)確捕捉熒光發(fā)射的波長(zhǎng)。
激發(fā)濾光片、二向分色鏡以及發(fā)射濾光片通常包含在同一立方體內(nèi),通常被設(shè)計(jì)來(lái)匹配特定熒光團(tuán)或熒光蛋白的光譜。偶爾情況下,濾光片也可能不在立方體內(nèi),但會(huì)安裝在一個(gè)轉(zhuǎn)輪(稱為濾光片轉(zhuǎn)盤(pán))上。濾光片轉(zhuǎn)盤(pán)使您可以混合搭配盡可能匹配所需要的激發(fā)和發(fā)射波長(zhǎng)。其終極目標(biāo)是捕獲到您希望從結(jié)合靶標(biāo)的熒光基團(tuán)束上捕獲的光信號(hào),同時(shí)阻斷系統(tǒng)其他部分的任何光線(環(huán)境光、激發(fā)光源等)。
熒光信號(hào)檢測(cè)濾光片的不同類型
通常情況下,濾光片組被設(shè)計(jì)成可用于捕獲指定熒光團(tuán)的最大激發(fā)和發(fā)射波長(zhǎng),但不會(huì)捕獲所有的熒光。多數(shù)現(xiàn)代化濾光片組的設(shè)計(jì)旨在確保激發(fā)濾光片只允許指定波長(zhǎng)區(qū)間的光線通過(guò)。這種類型的濾光片稱為帶通濾光片(band-pass filter)。帶通濾光片通常通過(guò)中間波長(zhǎng)和區(qū)間寬度確定。在較為簡(jiǎn)單的熒光顯微鏡裝置中,一旦激發(fā)光線離開(kāi)激發(fā)濾光片,即會(huì)照射到靶標(biāo)上,靶標(biāo)上的熒光基團(tuán)隨即變?yōu)榧ぐl(fā)狀態(tài),然后發(fā)射向光譜的紅外端(相對(duì)于激發(fā)光線)遷移的光線。并非所有此類發(fā)射光線都會(huì)被檢測(cè)器捕獲到——僅那些允許通過(guò)二向分色鏡且能通過(guò)發(fā)射濾光片的光線。發(fā)射濾光片通常為帶通濾光片或長(zhǎng)通濾光片,具體取決于特定的熒光團(tuán)和成像實(shí)驗(yàn)。如果您希望讓超過(guò)特定波長(zhǎng)的光線通過(guò)檢測(cè)器,可選擇長(zhǎng)通濾光片。